一、項目背景介紹
端粒酶（Telomerase）是由RNA和蛋白質組成的一種核糖核蛋白酶。人端粒酶RNA組分(hTR)于1995年被克隆，其中含有端粒重復序列的模板（5’-CUAACCCUAAC-3’）；蛋白質組分具有RNA依賴的DNA多聚酶活性。端粒酶能以自身RNA為模板復制合成端粒序列，端粒DNA是一系列重復的富含G的DNA序列，這一序列在生物進化中具有高度的保守型（-TTAGGG-),端粒在保護基因組DNA不被降解、防止染色體有害變異（染色體末端融合、重排、移位和缺失等）起重要作用）。端粒酶的功能包括添加端粒重復序列，端粒長度的穩定和維持，以及染色體的整體空間取向、結構完整性和穩定性。
在胚性細胞等增殖活躍的細胞中具有端粒酶活性，而在正常成熟體細胞中端粒酶失活，同時還發現絕大多數永生性細胞株和腫瘤細胞株都呈端粒酶陽性，而在癌旁組織和正常組織中陽性率則很低，推測端粒酶可能是一個廣泛的腫瘤標志物，端粒酶反應超越了細胞的增殖限制，這可能是惡性腫瘤發生的一個先決條件。
傳統的端粒酶研究方法是以探針延伸為基礎測定端粒酶活性，需要大量的樣品材料，且檢驗靈敏度受限，直到1994 年kim等采用端粒重復擴增法（Telomeric Repeat Amplification Protocol,TRAP）所取代。標準的TRAP法檢測是通過PCR擴增端粒酶反應的產物，使用放射性標記，經凝膠電泳后，通過放射自顯影顯示檢測結果。該方法相較于傳統的方法，檢測靈敏度有所提升，然而在檢測環節仍然操作繁瑣，且結果判讀存在主觀性。我公司采用的CELL STR ID®端粒酶TRAP+CE檢測方法，提升了檢測效率（全流程：4-6h），結果判讀更加自動化和標準化，且檢測靈敏度也有大幅度地提升。
二、端粒酶檢測方法及流程介紹
檢測端粒酶活性的常用方法：
2.1、直接檢測端粒酶（蛋白及RNA的結合復合物）的活性，檢測它是否可以延伸RNA模板，然后跑膠或者探針雜交，檢測端粒cDNA延伸的長度，以此來判斷端粒酶的活性高低。（TRAP法）
不足：經典方法，但該方法需要放射性同位素標記及制膠；重復性差、周期長、主觀判讀等。
2.2、間接檢測端粒酶組分（催化亞基的mRNA量）的表達量。
不足：本質是檢測端粒酶的一個組分蛋白TERT的mRNA的表達量, 但是在多數細胞中，端粒酶催化亞基的表達很難檢測到,且mRNA的表達量并不一定能準確反映端粒酶的活性強度，因端粒酶是一種由RNA及多種蛋白組成的復合物，TERT酶只是其中較為主要的一種蛋白。
三、HKGENE端粒酶檢測（TRAP+CE）流程：
3.1 樣本處理：端粒酶提取試劑盒，按照操作說明書，取適量細胞提取蛋白。-80°保存待用。
3.2 端粒擴增：端粒酶擴增試劑盒，按照操作說明，擴增端粒重復序列。
3.3 端粒序列檢測：毛細管電泳檢測，按照操作說明進行檢測。
3.4 端粒擴增產物結果分析： 按照SOP進行數據分析。
3.5 報告整理：
四、CELL STR ID®端粒酶檢測委托檢測流程
4.1 電話或咨詢確認相關信息（價格、樣本要求、周期、付款及合同）
4.2 送樣檢測，填寫電子訂單發送至微信：caijie037
4.3 檢測分析、報告整理、結果發送。
五、相關文獻：
5.1Telomeres and telomerase: three decades of progress JW Shay, WE Wright - Nature Reviews Genetics, 2019 - nature.com
5.2 Alternative lengthening of telomeres: Models, mechanisms and implications. Nat Rev Genet. 11:319–330. 2010. View Article : Google Scholar : PubMed/NCBI
5.3 Telomerase activity concentrates in the mitotically active segments of human hair follicles. J Invest Dermatol. 108:113–117. 1997. View Article : Google Scholar : PubMed/NCBI
5.4 Detection of telomerase activity in human cells and tumors by a telomeric repeat amplification protocol (TRAP) Methods in Cell Science 17: 1-15, 1995
六、樣本要求及運輸
細胞數量：≥1*10的6次方。1.5ml離心管
干冰運輸。
七、端粒酶檢測意義及延伸服務：
端粒酶檢測意義：細胞成瘤性體外評估、細胞傳代穩定性評估、iPSC殘留檢測、端粒酶抑制劑效果評估
延伸服務：端粒酶檢測方法學驗證、提供配套自檢方案（儀器、試劑、軟件、技術培訓），便于用戶實現自主可控監測。同一套儀器可實現STR鑒定、種屬鑒定、菌種鑒定、端粒酶檢測、HLA分型、宿主細胞DNA片段殘留及片段大小分析等。
