1、Luminex液相芯片的介紹
液相芯片,又稱懸浮陣列、流式熒光技術,是基于美國Luminex公司研制的多功能流式點陣儀(Luminex 100TM)開發的多功能生物芯片平臺,通常用于免疫分析、核酸研究、酶學分析、受體和配體識別分析等研究。也是目前唯一得到權威機構和醫學界共同認可用于臨床診斷的生物芯片平臺。液態芯片是一種全新概念的生物芯片。該技術的核心是把微小的聚苯乙烯小球(5.6um)用熒光染色的方法進行編碼,然后將每種顏色的微球(或稱為熒光編碼微球)共價交聯上針對特定檢測物的探針、抗原或抗體。 應用時,先把針對不同檢測物的編碼微球混合,再加入微量待檢樣本,在懸液中靶分子與微球表面交聯的分子進行特異性地結合,在一個反應孔內可以同時完成多達100種不同的生物學反應。最后用LuminexTM分析軟件進行分析,儀器通過兩束激光分別識別編碼微球和檢測微球上報告分子的熒光強度。因為分子雜交或免疫反應是在懸浮溶液中進行,檢測速度極快,而且可以在一個微量液態反應體系中同時檢測多達100個指標。
Luminex 技術應用微球和流式細胞儀的原理。 微球內部含有三種熒光免疫熒光,通過熒光不同的比例可以區分500種不同的微球。每種微球可以用來檢測一種不同的蛋白或基因。 因此,利用微球技術,可以同時檢測高達500個蛋白或基因。該技術利用熒光編碼的微球共價交聯單克隆抗體,與被測定的目標分子結合后,加入熒光素標記的檢測抗體,再通過激光掃描熒光編碼來識別單個微球和測量“檢測熒光”強度來確定被測分子的濃度。在使用相同抗體對的條件下,luminex技術的測量結果在準確度、精確度、靈敏度方面與ELISA均可達到相似的水平。Luminex應用的熒光編碼微球帶有針對不同目標分子的特異性抗體,不同的微球在一定程度上可以自由組合,這樣在一次實驗中可以同時完成多個目標分子的分析。多目標分子的同時測定可以大大減少生物樣品的消耗量,節省成本和測定時間,并且使多種目標分子之間相關性的分析更加準確。很多公司已經開始提供Luminex試劑盒,用于基礎和臨床醫學研究以及臨床檢測。目前,Luminex試劑盒已經可以檢測500多種蛋白質分子,包括細胞因子、激素、自身抗體、腫瘤標志物等。
2、luminex液相芯片檢測的優勢
(1)一次檢測1-100個指標;
(2)既能檢測蛋白,又能檢測核酸;
(3)既能用于臨床,又能用于科研。
3、液相芯片的應用
(1) DNA雜交分析
SNP檢測
基因表達譜分析
(2)免疫學分析
細胞因子檢測
受體-配體分析
酶分析
蛋白質-蛋白質相互作用分析
蛋白質-DNA相互作用分子
服務內容包括不限于:
l 細胞因子/化學因子檢測
l 細胞信號轉導檢測
l 神經因子檢測
l 骨代謝因子檢測
l 皮膚生長調控因子檢測
l 凋亡及敗血癥因子檢測
l 免疫球蛋白分型檢測
l 內分泌激素檢測
l 心血管因子檢測
l 腎臟毒性研究檢測
l 代謝因子檢測
4.檢測樣本類型
血清、血漿、細胞培養上清、蛋白提取物等(眼淚、房水、唾液、體腔灌洗液、細胞裂解物等)
5. 樣品收集及保存
(1)、血清樣品的制備:
a.讓血液凝固至少30分鐘以上,1000g離心10分鐘,移出血清后立即進行測定,或分裝后在≤-20攝氏度條件下保存。
b. 避免多次凍融(>2)。
c.對于冰凍樣品,在使用前應充分融解,混勻后離心。
d.在測定前,推薦3000g離心樣品5分鐘。
(2)血漿樣品的制備
a.血漿收集時推薦使用EDTA作為抗凝劑。對30分鐘內收集的血液標本1000g離心10分鐘。移出血漿后立即進行含量測定,或分裝后在≤-20攝氏度條件下保存。
b.避免多次凍融(>2)。
c.對于冰凍樣品,在使用前應充分融解,混勻后離心。
d.制備血漿樣品時推薦使用EDTA作為抗凝劑。
e.在含量測定前,推薦3000g離心樣品5分鐘。
6、樣本保存和運輸
建議保存于-80度,避免反復凍融。
7、服務流程
制定檢測方案→樣品檢測→結果分析→報告出具→可為客戶提供更深層次的服務(實驗設計、數據分析、論文撰寫與發表)
注: 報告以excel表格形式,包括每種蛋白在每個標本中的表達量。