• 甲基化分析檢測

    甲基化檢測多選方案:                                                        
    DNA甲基化是最早發現的修飾途徑之一,真核生物中甲基化僅發生于胞嘧啶,即在DNA甲基化轉移酶(DNMTs)的作用下的CpG二核苷酸5’端的胞嘧啶轉變為5’-甲基胞嘧啶。大量研究表明,DNA甲基化能引起染色質結構、DNA構象、DNA穩定性及DNA與蛋白質相互作用方式的改變,從而控制基因表達。DNA甲基化通常抑制基因表達,去甲基化則誘導了基因重新活化和表達。這種DNA修飾方式在不改變基因序列的前提下實現對基因表達的調控。脊椎動物DNA甲基化狀態與生長發育調控及生理狀態密切相關,比如在腫瘤發生時,抑癌基因CpG島以外的CpG序列非甲基化程度增加,CpG島中的CpG則程高度的甲基化狀態,導致抑癌基因表達的下降。
        原核生物中甲基化多發生在CCA/TGG和GATC序列;真核生物中DNA甲基化一般發生在CpG位點上;哺乳動物DNA甲基化只發生在CpG島的胞嘧啶,植物甲基化發生在CpG和CpNpG。甲基化會使胞嘧啶轉為5-甲基胞嘧啶,CpG位點在基因組是不常見的,主要密集于接近基因啟動子的位置,統稱為CpG島。CpG位點的甲基化可以對基因表現有重要的影響。
        哺乳動物中,CpG序列在基因組中出現的頻率僅有1%,遠低于的其它雙核苷酸序列。但在基因組的某些區域中CpG序列密度很高,可以達均值的5倍以上即所謂的CpG島。通常,CpG島大約含有500多個堿基,位于基因的啟動子區或第一個外顯子區。 在哺乳動物基因組中約有4萬個CpG島,而且只有CpG島的胞嘧啶能夠被甲基化。

     

    編號 服務名稱 內容說明 周 期 價    格
    HK-CG-101 甲基化檢測—引物設計 各種檢測方法的引物設計 2工作日 ¥300/對引物
    HK-CG-102 甲基化檢測—引物合成 對設計好的引物進行合成,2OD 1周 ¥60/對  引物長度小于30bp
    ¥2.5/bp 引物長度大于30bp
    HK-CG-103 甲基化檢測—BSP克隆測序法 設計合成引物、DNA質檢、亞硫酸氫鹽修飾、擴增、克隆、產物測序、分析報告 4-8周 詢價
    HK-CG-104 甲基化檢測—HRM法 設計合成引物、DNA質檢、亞硫酸氫鹽修飾、HRM PCR擴增檢測、分析報告 4-8周 詢價
    HK-CG-105 甲基化檢測—MSP法 設計合成引物、DNA質檢、亞硫酸氫鹽修飾、擴增、瓊脂糖電泳檢測、分析報告 4-6周

    詢價

    HK-CG-106 甲基化檢測—焦磷酸測序法 設計合成引物、DNA質檢、亞硫酸氫鹽修飾、擴增、產物測序、分析報告 8-10周

    詢價

     

    成功案例:

        中國農業科學院蔬菜花卉研究所、北京朝陽醫院、哈爾濱醫科大學、中國疾病預防控制中心、中國農業大學、北京協和醫院、太原中心醫院、第三軍醫大學、天津總醫院、廣東醫學院附屬醫學院、寧夏醫科大學、淮安市第二人民醫院、江蘇省人民醫院、大連醫學院附屬第二醫院、廣東醫學院病理教研室、醫科院病原所、溫州醫學院、湖南南華大學、山東大學、中國醫科大學附屬第一醫院、湖南湘雅醫院等。

     

    甲基化研究思路:
    1. 尋找甲基化位點
        1) 甲基化二代測序尋找甲基化位點;
        2) 對照組和實驗組進行甲基化芯片檢測,找到相關的甲基化位點;
        3) 一些相關研究顯示某些基因存在表達量降低的現象,可預測該基因是否存在CpG島;
        4) 根據文獻尋找相關基因的甲基化位點。
    2. 驗證甲基化位點,并進行甲基化程度分析
        采用對照組和實驗組樣本進行甲基化驗證。
        1) MSP方法:可進行特定位點甲基化驗證,適用于甲基化芯片后的結果,無法進行甲基化程度分析;
        2) BSP克隆測序法:驗證某些相關基因的甲基化位點,并計算出精確的甲基化程度百分比;
        3) HRM法:適用于大批量樣本甲基化驗證,并能計算出甲基化程度范圍;

        4)焦磷酸測序法: 驗證某些相關基因的甲基化位點,并計算出精確的甲基化程度百分比。

    3. 分析甲基化位點與研究的相關性
        根據對照組和實驗組樣本的檢測結果,分析與研究的相關性。
        1) 比較對照組和實驗組相同甲基化位點甲基化是否有差異;
        2) 比對對照組合實驗組相同基因啟動子區甲基化程度是否有差異;
    4. 驗證啟動子發生甲基化的基因的表達量變化
        采用熒光定量PCR的方法檢測相關基因的表達量,如果表達量降低,可能由于啟動子區發生甲基化導致的,從而影響該基因所在的某些通路,導致一些疾病,或表型發生變化;如果沒有發生變化,可能由于發生甲基化的區域與轉錄因子之間關聯不是很密切,從而不會影響基因的表達

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